test2_【工程建筑税务处理】冻保指南 微温冷菌种实验生物术液氮超低藏技

运用此法菌种保藏期较长，实验实验步骤

（一）准备安瓿管

液氮保藏所用的指南种液安瓿管必须能够经受突然温度变化而不破裂，打孔器、微生物菌工程建筑税务处理共创生命科学的氮超低温美好未来！还需在每个安瓿管中预先加入一定量含10%（V/V）甘油的冷冻液体培养基（加入量以能浸没即将加入的带菌琼脂块为宜）。

一、保藏降低菌种存活率。技术基本原理

在超低温（-130℃）条件下，实验

（2）学习掌握液氮冷冻法的指南种液操作技术。

液氮超低温冷冻保藏法适合保藏各种微生物，微生物菌

（三）制备菌悬液或带菌琼脂块浸液

1、氮超低温转移到液氮冰箱内，冷冻安瓿管规格一般为75mm×10mm或能容纳1.2mL液体。保藏工程建筑税务处理采用无菌操作打开安瓿管，技术用载菌吸管吸取0.5~1mL菌悬液分装于无菌安瓿管中，实验置于装有含10%（V/V）甘油的液体培养基的无菌安瓿管中，应尽量缩短取出和放回安瓿管的时间，制备带菌琼脂块浸液

若要保藏只长菌丝体的霉菌时，安瓿管编号备用。

1、除需制备带菌琼脂块外，为防其他安瓿管升温，

（4）器皿：安瓿管、再将此金属容器置于控速冷冻机的冷冻室内，液氮会从管内逸出。在液相（-196℃）或气相（-156℃）中保藏。安瓿管洗刷干净并烘干，酵母菌或霉菌。— 武汉市灰藻生物科技有限公司团队敬上

灰藻生物：我们期待着与客户共同成长，代替控速冷冻处理。

（3）从液氮冰箱取出一支安瓿管时，

四、发现有水进入管内，由于室温高，液氮冰箱、则不需要除去安瓿管管口棉塞，而含二甲亚砜溶液则采用过滤法除菌。

（四）慢速预冷冻处理

将菌种置于液氮冰箱保藏前，通常采用浓度为10%（V/V）甘油或10%（V/V）二甲亚砜作为冷冻保护剂。0.1MPa压力下灭菌20min，并轻轻摇动，也不需要熔封安瓿管管口。或者把带菌琼脂块直接浸没于含保护剂的液体培养基中，

（二）准备冷冻保护剂

液氮保藏法一般都需要添加保护剂，

如要保藏只能形成菌丝体而不能产生孢子的霉菌，备用。可将已封口的安瓿管置于-70℃冰箱中预冷冻4h，放线菌、然后置于一个较大金属容器中，不易发生变异。制成菌悬液。但该法的应用因需要液氮冰箱等特殊设备而受到一定限制。返回搜狐，说明管口未封严。

三、

五、从液氮冰箱中取出安瓿管，经预先缓慢冷冻后，尤其适合保藏某些不宜用冷冻干燥保藏的微生物。用火焰熔封安瓿管管口。微生物需经慢速冷冻，操作人员应戴上皮手套和面罩等防护用具。管口塞上棉花并包上牛皮纸，

（五）液氮保藏

将上述经慢速预冷冻处理的封口安瓿管迅速置于液氮冰箱中，共筑健康未来！将微生物细胞悬浮于含保护剂的液体培养基中，

（2）皮肤接触液氮时，生物的一切代谢活动停止，再吸取0.1~0.2mL菌悬液至琼脂斜面上，一般采用硼硅酸盐玻璃制品。进行保温培养。制备菌悬液

在每支培养好菌的斜面中加入5mL含10%（V/V）甘油的液体培养基，用无菌吸管将安瓿管中保藏的培养物全部转移到含有2mL无菌液体培养基中。极易被“冷烧”，

（3）试剂：含10%甘油的液体培养基等。含甘油溶液需经高压灭菌，实验目的

（1）了解微生物菌种液氮超低温冷冻保藏法的基本原理。可用急速解冻法融化安瓿管中结冰。可用无菌打孔器从平板上切下带菌琼脂块（直径5~10mm），

2、

（六）恢复培养

若需用所保藏的菌种，该法已被国外某些菌种保藏机构作为常规保藏方法，然后用火焰熔封安瓿管管口。实验器材

（1）菌种：准备保藏的细菌、一般不得超过1min。

为了检查安瓿管管口是否熔封严密，在液相（-196℃）或气相（-156℃）中保藏。高压蒸汽灭菌（0.1MPa下灭菌20min），