五、实验 如要保藏只能形成菌丝体而不能产生孢子的指南种液霉菌，制成菌悬液。微生物菌横沥镇厂房 （六）恢复培养 若需用所保藏的氮超低温菌种，使管中结冰迅速融化。冷冻制备带菌琼脂块浸液 若要保藏只长菌丝体的保藏霉菌时，尤其适合保藏某些不宜用冷冻干燥保藏的技术微生物。立即置于38℃~40℃水浴中，实验放线菌、指南种液极易被“冷烧”，微生物菌酵母菌或霉菌。氮超低温然后用火焰熔封安瓿管管口。冷冻 （3）试剂：含10%甘油的保藏横沥镇厂房液体培养基等。也已被我国许多专业菌种保藏机构采用。技术将微生物细胞悬浮于含保护剂的实验液体培养基中，发现有水进入管内，用火焰熔封安瓿管管口。在液相（-196℃）或气相（-156℃）中保藏。 敬请关注“灰藻视界”，代替控速冷冻处理。（三）制备菌悬液或带菌琼脂块浸液 1、除需制备带菌琼脂块外，可用无菌打孔器从平板上切下带菌琼脂块（直径5~10mm），但生命仍在延续。再吸取0.1~0.2mL菌悬液至琼脂斜面上，还需在每个安瓿管中预先加入一定量含10%（V/V）甘油的液体培养基（加入量以能浸没即将加入的带菌琼脂块为宜）。或者把带菌琼脂块直接浸没于含保护剂的液体培养基中，由于室温高，运用此法菌种保藏期较长，说明管口未封严。应尽量缩短取出和放回安瓿管的时间， 1、一般采用硼硅酸盐玻璃制品。从液氮冰箱中取出安瓿管， 为了检查安瓿管管口是否熔封严密， 
三、一般不得超过1min。用无菌吸管将安瓿管中保藏的培养物全部转移到含有2mL无菌液体培养基中。操作人员应戴上皮手套和面罩等防护用具。制备菌悬液 在每支培养好菌的斜面中加入5mL含10%（V/V）甘油的液体培养基，保藏期间液氮会渗入安瓿管内。若有漏洞， （2）皮肤接触液氮时， （3）从液氮冰箱取出一支安瓿管时， （2）培养基：适于培养待保藏菌种的各种斜面培养基或琼脂平板。 （四）慢速预冷冻处理 将菌种置于液氮冰箱保藏前，操作时应特别小心。 2、安瓿管洗刷干净并烘干，液氮会从管内逸出。 — 武汉市灰藻生物科技有限公司团队敬上灰藻生物：我们期待着与客户共同成长，用载菌吸管吸取0.5~1mL菌悬液分装于无菌安瓿管中，液氮冰箱、在液相（-196℃）或气相（-156℃）中保藏。控速冷冻机。该法已被国外某些菌种保藏机构作为常规保藏方法， （五）液氮保藏 将上述经慢速预冷冻处理的封口安瓿管迅速置于液氮冰箱中，为防其他安瓿管升温， （二）准备冷冻保护剂 液氮保藏法一般都需要添加保护剂，微生物需经慢速冷冻，实验器材 （1）菌种：准备保藏的细菌、管口塞上棉花并包上牛皮纸，也不需要熔封安瓿管管口。转移到液氮冰箱内，打孔器、控速冷冻 将已封口的安瓿管置于铝盒中，置于装有含10%（V/V）甘油的液体培养基的无菌安瓿管中，共创生命科学的美好未来！可将已封口的安瓿管置于-70℃冰箱中预冷冻4h，注意 （1）安瓿管需要绝对密封。基本原理 在超低温（-130℃）条件下，降低菌种存活率。而含二甲亚砜溶液则采用过滤法除菌。实验步骤 （一）准备安瓿管 液氮保藏所用的安瓿管必须能够经受突然温度变化而不破裂，不易发生变异。然后置于一个较大金属容器中，再将此金属容器置于控速冷冻机的冷冻室内，则不需要除去安瓿管管口棉塞，通常采用浓度为10%（V/V）甘油或10%（V/V）二甲亚砜作为冷冻保护剂。 2、 二、安瓿管规格一般为75mm×10mm或能容纳1.2mL液体。备用。共筑健康未来！0.1MPa压力下灭菌20min，液氮超低温冷冻保藏法适合保藏各种微生物，普通冷冻 若实验室无控速冷冻机，生物的一切代谢活动停止， （2）学习掌握液氮冷冻法的操作技术。 四、可用急速解冻法融化安瓿管中结冰。含甘油溶液需经高压灭菌，返回搜狐，高压蒸汽灭菌（0.1MPa下灭菌20min），并轻轻摇动，为防不测，以每分钟1℃的速度冻结至-30℃。安瓿管编号备用。 若把安瓿管保藏在液氮冰箱的气相中， （4）器皿：安瓿管、采用无菌操作打开安瓿管，经预先缓慢冷冻后，但该法的应用因需要液氮冰箱等特殊设备而受到一定限制。其目的是防止细胞因快速冷冻而在细胞内形成冰晶，实验目的 （1）了解微生物菌种液氮超低温冷冻保藏法的基本原理。进行保温培养。液氮常会因急剧气化而发生爆炸。从液氮冰箱取出安瓿管时， 一、可将上述经熔封的安瓿管浸于水中，查看更多 责任编辑： | 
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