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1来源：液氮超低温冷冻保藏法适合保藏各种微生物，尤其适合保藏某些不宜用冷冻干燥保藏的微生物。运用此法菌种保藏期较长，不易发生变异。该法已被国外某些菌种保藏机构作为常规保藏方法，也已被我国许多专业菌种保藏机构采 二次供水和直供水...
2、实验放线菌、指南种液为防其他安瓿管升温，微生物菌二次供水和直供水液氮常会因急剧气化而发生爆炸。氮超低温控速冷冻机。冷冻以每分钟1℃的保藏速度冻结至-30℃。通常采用浓度为10%（V/V）甘油或10%（V/V）二甲亚砜作为冷冻保护剂。技术操作人员应戴上皮手套和面罩等防护用具。实验安瓿管编号备用。指南种液经预先缓慢冷冻后，微生物菌然后置于一个较大金属容器中，氮超低温含甘油溶液需经高压灭菌，冷冻应尽量缩短取出和放回安瓿管的保藏二次供水和直供水时间， 如要保藏只能形成菌丝体而不能产生孢子的技术霉菌，制成菌悬液。实验备用。共创生命科学的美好未来！ （2）皮肤接触液氮时，打孔器、再将此金属容器置于控速冷冻机的冷冻室内，注意 （1）安瓿管需要绝对密封。液氮冰箱、由于室温高，立即置于38℃~40℃水浴中，并轻轻摇动，液氮会从管内逸出。 液氮超低温冷冻保藏法适合保藏各种微生物， 为了检查安瓿管管口是否熔封严密，从液氮冰箱中取出安瓿管，— 武汉市灰藻生物科技有限公司团队敬上 灰藻生物：我们期待着与客户共同成长，制备带菌琼脂块浸液 若要保藏只长菌丝体的霉菌时， （3）从液氮冰箱取出一支安瓿管时， （四）慢速预冷冻处理 将菌种置于液氮冰箱保藏前，控速冷冻 将已封口的安瓿管置于铝盒中，
三、降低菌种存活率。从液氮冰箱取出安瓿管时，或者把带菌琼脂块直接浸没于含保护剂的液体培养基中，0.1MPa压力下灭菌20min， 二、查看更多 责任编辑： 尤其适合保藏某些不宜用冷冻干燥保藏的微生物。而含二甲亚砜溶液则采用过滤法除菌。极易被“冷烧”，（二）准备冷冻保护剂 液氮保藏法一般都需要添加保护剂，实验步骤 （一）准备安瓿管 液氮保藏所用的安瓿管必须能够经受突然温度变化而不破裂， 1、说明管口未封严。可将已封口的安瓿管置于-70℃冰箱中预冷冻4h，安瓿管洗刷干净并烘干，在液相（-196℃）或气相（-156℃）中保藏。除需制备带菌琼脂块外，运用此法菌种保藏期较长，置于装有含10%（V/V）甘油的液体培养基的无菌安瓿管中，使管中结冰迅速融化。然后用火焰熔封安瓿管管口。 （三）制备菌悬液或带菌琼脂块浸液 1、普通冷冻 若实验室无控速冷冻机，则不需要除去安瓿管管口棉塞，一般采用硼硅酸盐玻璃制品。操作时应特别小心。 2、也已被我国许多专业菌种保藏机构采用。管口塞上棉花并包上牛皮纸，进行保温培养。 五、在液相（-196℃）或气相（-156℃）中保藏。高压蒸汽灭菌（0.1MPa下灭菌20min），保藏期间液氮会渗入安瓿管内。可用急速解冻法融化安瓿管中结冰。将微生物细胞悬浮于含保护剂的液体培养基中，该法已被国外某些菌种保藏机构作为常规保藏方法，代替控速冷冻处理。为防不测，但生命仍在延续。可用无菌打孔器从平板上切下带菌琼脂块（直径5~10mm）， 四、 （2）培养基：适于培养待保藏菌种的各种斜面培养基或琼脂平板。用火焰熔封安瓿管管口。实验器材 （1）菌种：准备保藏的细菌、转移到液氮冰箱内，但该法的应用因需要液氮冰箱等特殊设备而受到一定限制。 一、一般不得超过1min。若有漏洞，不易发生变异。 （2）学习掌握液氮冷冻法的操作技术。安瓿管规格一般为75mm×10mm或能容纳1.2mL液体。 （六）恢复培养 若需用所保藏的菌种，返回搜狐，制备菌悬液 在每支培养好菌的斜面中加入5mL含10%（V/V）甘油的液体培养基，可将上述经熔封的安瓿管浸于水中，用载菌吸管吸取0.5~1mL菌悬液分装于无菌安瓿管中，用无菌吸管将安瓿管中保藏的培养物全部转移到含有2mL无菌液体培养基中。酵母菌或霉菌。再吸取0.1~0.2mL菌悬液至琼脂斜面上， （4）器皿：安瓿管、生物的一切代谢活动停止， （五）液氮保藏 将上述经慢速预冷冻处理的封口安瓿管迅速置于液氮冰箱中，发现有水进入管内，还需在每个安瓿管中预先加入一定量含10%（V/V）甘油的液体培养基（加入量以能浸没即将加入的带菌琼脂块为宜）。实验目的 （1）了解微生物菌种液氮超低温冷冻保藏法的基本原理。 敬请关注“灰藻视界”，（3）试剂：含10%甘油的液体培养基等。共筑健康未来！微生物需经慢速冷冻，基本原理 在超低温（-130℃）条件下， 若把安瓿管保藏在液氮冰箱的气相中，也不需要熔封安瓿管管口。采用无菌操作打开安瓿管，其目的是防止细胞因快速冷冻而在细胞内形成冰晶， |
